米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因的克隆表达及酶学性质分析

摘要：

根据NCBI（GenBankAccessionNo．：D83732．1）中注册的米曲霉内切葡聚糖酶＆馏基因序列设计引物，以本实验室自行筛选的天然米曲霉基因组DNA为模板，PCR高保真扩增出内切葡聚糖酶基因eg，将其定向插入到酵母表达载体pPICZαA上，转化酵母宿主菌X33，刚果红水解圈筛选结果表明已成功表达。SDS-PAGE分析表明，表达产物分子量约为65ku。对酵母表达工程菌X33一eg进行发酵条件优化，结果显示最适甲醇诱导浓度为0．75％，用1L三角瓶诱导培养5天达到最高酶活120U／mL。对重组酶的酶学性质分析表明，其最适反应pH值和温度分别为pH4．0和45℃，在30～45℃和pH3．4～pH6．9范围内可保持内切葡聚糖酶最高酶活力70％以上。

关键词：米曲霉、内切葡聚糖酶、基因克隆、酵母表达、酶学性质

所属期刊栏目：38

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：四川省科技厅科技支撑项目资助2008GZ0150

在线出版日期：2013-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：17-22