双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒

摘要：

目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RT-ERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GⅠ与GⅡ型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法.方法:分别将GⅠ、GⅡ NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoVRNA参考样品.以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GⅠ、GⅡNoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度.最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性.结果:建立MS2与GⅠ、MS2与GⅡ两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8μL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品.应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致.结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GⅠ和GⅡNoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础.

关键词：诺如病毒、逆转录-酶促重组等温扩增技术、双重荧光、快速检测、贝类

所属期刊栏目：44

分类号：TS201.6(食品工业)

资助基金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项;国家重点研发计划

在线出版日期：2023-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：355-363