克罗诺杆菌DNA质粒标准样品的制备及在婴幼儿配方奶粉检测中的应用

摘要：

选取阪崎克罗诺杆菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作为靶序列,构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌.通过测序和菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对构建的重组质粒进行验证,传15代后对重组质粒进行测序验证质粒稳定性.制备的atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品,对其进行定性实验,并检测其检出限和稳定性,然后使用atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品对婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌进行检测.通过菌落PCR和测序结果显示atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品制备成功.PCR体系对质粒标准样品检测具有特异性,atpD、gyrB、infB、fusA和glnS检出限分别为1.14×106、1.07×107、1.09×107、1.73 ×105、7.54 × 105拷贝/μL.质粒冻干粉可以在-20、4、25℃稳定保存90d.将质粒标准样品用于23份婴幼儿奶粉样品检测,检测出1份具有gyrB管家基因.参考GB 4789.40-2016《食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》的方法进行传统微生物分离检测,未检测出克罗诺杆菌.相较于传统方法质粒标准样品的应用极大提高了样品的检测效率.

关键词：克罗诺杆菌、管家基因、质粒标准样品、快速检测

所属期刊栏目：44

分类号：TS207.4(食品工业)

资助基金：国家重点研发计划2017YFC1601400

在线出版日期：2023-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：322-331