SpCas9蛋白的高效可溶表达及应用

摘要：

规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)主要元件Cas9蛋白一般采用大肠杆菌表达,但在表达纯化过程中易出现形成包涵体形式的不溶解性蛋白,内毒素含量高、蛋白过大导致蛋白折叠不正确、产量低等问题.为实现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9蛋白(SpCas9)在大肠杆菌中的高效可溶表达,进一步促进其应用及编辑技术的推广,本研究应用GB1促溶标签提高Cas9蛋白表达量及溶解度,同时通过使用多重启动子策略进一步提高了Cas9蛋白表达量.两种策略的组合使Cas9蛋白表达量提升了2.52倍.体外酶切分析显示融合GB1标签的Cas9蛋白功能活性不受影响.进一步组装RNP复合物转化黑曲霉宿主成功破坏了pyrG基因.

关键词：Cas9蛋白、核糖核蛋白复合体、蛋白表达与纯化、多重启动子

所属期刊栏目：44

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家重点研发计划;佛山市核心技术攻关项目

在线出版日期：2023-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：150-157