胰凝乳蛋白酶SplB在枯草芽抱杆菌中的重组表达及应用

摘要：

通过启动子优化、宿主筛选,构建了C端带His-tag的胰凝乳蛋白酶类蛋白酶SplB表达载体,成功实现了SplB在枯草芽抱杆菌中的重组表达,对纯化的重组SplB进行酶学性质研究,并实现了重组蛋白酶SplB在重组蛋白Prx标签切割中的应用.结果表明,以枯草芽抱杆菌ATCC6051△10为宿主,通过启动子P43介导的重组蛋白酶SplB表达活力最高(10.24 U/mL).通过亲和层析纯化了重组表达的SplB,并进行酶学性质研究,其最适温度为40℃,最适pH值为8.5,且具有良好的温度和pH值稳定性.在离子浓度较低情况下,Co2+对重组SplB活力有促进作用,Mg2+、K+不影响酶活力;而Cu2+、Zn2+、Ni+离子抑制SplB活力;十二烷基硫酸钠极大抑制重组SplB活力.将重组SplB应用于切割重组蛋白Prx的标签,结果表明,重组SplB具有WELQ肽段标签切割作用,并且SplB浓度越高,目标条带越浓.本研究为优化SplB的重组表达及在食品、医药领域的应用提供支持.

关键词：胰凝乳蛋白酶SplB、枯草芽抱杆菌、WELQ肽段标签切割

所属期刊栏目：44

分类号：Q939.97(微生物学)

资助基金：国家重点研发计划2021YFC2100200

在线出版日期：2023-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：181-188