金黄色葡萄球菌RAA-LFD快速检测方法的建立与应用

摘要：

靶向金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)保守基因(nuc)序列设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立金黄色葡萄球菌的重组酶等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)结合侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)的快速检测方法.该方法在引物浓度200 nmol/L、33℃反应20 min即可实现靶标基因片段的有效扩增.特异性分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应,灵敏度分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌的检出限为4fg/μL(DNA)与1.83×102 CFU/mL(纯菌液).用人工污染牛奶样品验证RAA-LFD方法的可靠性,结果显示在增菌6 h时,RAA-LFD方法可检测到1.83×101 CFU/mL金黄色葡萄球菌.分别采用微生物生化鉴定法、PCR法与RAA-LFD方法对64份牛奶样品进行金黄色葡萄球菌检测,结果表明,RAA-LFD方法与微生物生化鉴定法总符合率为95.3％,与PCR法总符合率(98.4％)表现出较高的一致性.本研究建立的可视化检测方法具有特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点,为牛奶中金黄色葡萄球菌的检测提供新的发展方向.

关键词：金黄色葡萄球菌、重组酶等温扩增技术、侧流层析试纸条、快速检测

所属期刊栏目：43

分类号：R155.5(营养卫生、食品卫生)

资助基金：上海市科技兴农重点攻关项目2019-02-08-00-10-F01149

在线出版日期：2022-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：331-339