烟曲霉单宁酶Kex2位点突变及酶学特性表征

摘要：

研究单宁酶AfTanA中Kex2蛋白酶切割位点(K315-R316)对酶学性质的影响.通过对单宁酶AfTanA中Kex2蛋白酶切割位点(K315-R316)进行定点突变,构建单点突变体AfTanR316A和缺失突变体AfTanΔKR.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳检测发现两突变体Kex2蛋白酶抗性明显增强.经对酶学性质对比发现,两突变体具有较低的催化反应温度和较强的稳定性.单宁酶的最适反应温度由40℃(野生型)降低到20℃(两突变体).突变体AfTanΔKR和突变体AfTanR316A在pH 12.0条件下处理1 h后,剩余酶活力由野生型AfTanA的0％提高到85％和60％;而在50℃条件下处理1 h后,剩余酶活力由野生型AfTanA的2％提高到40％和21％,上述性质的改变有利于单宁酶在低温条件的应用和酶制剂的生产贮存.突变体AfTanR316A动力学参数Km和Vmax分别为1.149 mmol/L和10.427 mmol/(L·min),AfTanΔKR的动力学参数Km和Vmax分别为1.46 mmol/L和35.84 mmol/(L·min).此外,柿子汁经野生型单宁酶AfTanA和突变体处理后,多酚含量均提高50％左右.综上所述,单宁酶AfTanA中的Kex2蛋白酶切割位点(K315-R316)对酶的稳定性和催化效率影响显著,改造后的单宁酶AfTanΔKR能够更好地应用在食品工业中.

关键词：单宁酶、定点突变、Kex2蛋白酶、稳定性、食品酶

所属期刊栏目：41

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目;河北省食品科学与工程学科"双一流"建设资金项目

在线出版日期：2020-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：124-130