海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖苷酶催化位点关键氨基酸

摘要：

通过同源比对,对来自海洋氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans KQ 11)的右旋糖苷酶(记作AoDex)催化域及关键氨基酸进行预测,运用定点突变将AoDex催化域418-QTDGIELYKGSTMKNTFFNANDD-440中的5个氨基酸突变为甘氨酸,获得5种突变型右旋糖苷酶原核表达载体:pColdⅢ-KQN-Q418G、pColdⅢ-KQN-D420G、pColdⅢ-KQN-E423G、pColdⅢ-KQN-D439G、pColdⅢ-KQN-D440G,表达产物分别记为Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex、D440GDex.经过发酵表达,Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex几乎没有酶活力.D440GDex酶活力与AoDex一致;所不同的是,D440GDex在25～40℃时的酶活力提高了2～3倍,最适pH值也从AoDex的5.5变为6.5.数据表明,Q418、D420、E423、D439四个氨基酸残基是AoDex催化域中的关键氨基酸.D440突变为甘氨酸对该酶的性质有较大影响,也表明其不是催化域中的广义碱.本研究表明AoDex的催化机制与糖苷酶49家族是一致的,为AoDex的功能改造提供了理论支持.

关键词：右旋糖苷酶、定点突变、催化域、关键氨基酸、结构预测

所属期刊栏目：40

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目31471719;江苏省科技厅社会发展项目BE2016702

在线出版日期：2019-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：113-120