沙门氏菌重组酶聚合酶检测方法的建立及应用

摘要：

建立一种重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测沙门氏菌(Salmonella)的方法.本研究依据沙门氏菌侵袭蛋白A基因(invA)的保守序列设计特异性引物,通过对反应时间的优化,建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20 min,即可实现对目的片段的有效扩增;除沙门氏菌外,其他26种食源性致病菌均无扩增,具有良好的特异性;以沙门氏菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.1×10-3 ng/μL,与本研究应用的实时荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,PCR)方法一致;人工污染实验表明,当羊肉、鸡肉和西兰花样品污染量为4 CFU/25 g,增菌8h,即可通过RPA方法检出沙门氏菌.在人工污染实验中,RPA和PCR检测结果一致.本研究建立的沙门氏菌的RPA检测方法特异性强、操作简单、为食源性致病菌的鉴定提供了一种新的方向.

关键词：沙门氏菌、invA基因、重组酶聚合酶扩增、检测

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分类号：R155.5;Q93-3(营养卫生、食品卫生)

资助基金：国家质量监督检验检疫总局科研项目2016IK107;河北师范大学博士基金项目130401

在线出版日期：2019-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：298-303