金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表达

摘要：

为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56(GenBank:ARQ95812.1)的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白.将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET-30a-lys56,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,获得表达稳定的基因工程菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,利用镍琼脂糖亲和层析纯化表达产物.经在线软件预测结果显示,该蛋白分子质量为35.1 kDa,无信号肽和跨膜域,仅含有一个Ami 2结构域.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示重组蛋白表达成功,且以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清液,分子质量约35 kDa,与预期蛋白大小一致.重组蛋白最佳表达条件为:IPTG浓度0.5 mmol/L,20℃过夜诱导.

关键词：金黄色葡萄球菌、噬菌体、生物信息分析、内溶素、克隆表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金："十二五"国家科技支撑计划项目2015BAD16B0902;现代农业产业技术体系建设专项CARS-47

在线出版日期：2018-10-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：133-138