α-L-鼠李糖苷酶以催化活性包涵体形式异源表达及其酶学性质

摘要：

从解肝磷脂土地杆菌(Pedobacter heparinus)基因组DNA扩增获得两个α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78E和PhRha78G,构建于表达载体pET-28a;将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)进行异源表达,PhRha78E和PhRha78G以不溶性包涵体形式大量表达于沉淀中,每克菌体可分别获得0.42 g和0.39 g含目的酶包涵体的沉淀.酶活实验显示二者的不溶性包涵体具有催化活性,可以催化水解底物对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenol-α-L-rhamnopyranoside,PNPR),表明二者在大肠杆菌中以催化活性包涵体形式异源表达.PhRha78E和PhRha78G的最适反应pH值相近,分别为6.5和7.0,PhRha78E在酸性pH 4.8仍能保持62％酶活力,而PhRha78G在碱性pH 8.6依然保持72％酶活力;PhRha78E和PhRha78G的最适反应温度却相差很大,分别为60℃和40℃,PhRha78E在高温70℃条件下仍能保持69％酶活力,而PhRha78G在低温20℃条件下仍有43％酶活力;动力学常数kcat分别为0.18s-1和0.12s-1,Km分别为0.55 mmol/L和0.40 mmol/L.本研究揭示新型α-L-鼠李糖苷酶PhRha78E和PhRha78G在大肠杆菌中以催化活性包涵体形式异源表达,蛋白表达量大,二者酶学性质差异较大,可应用于不同的生物催化领域,并丰富了现有α-L-鼠李糖苷酶资源库.

关键词：α-L-鼠李糖苷酶、催化活性包涵体、解肝磷脂土地杆菌、异源表达

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分类号：Q814.2(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31400684;山西省基础研究计划项目2014021030-3:山西大学引进人才建设项目206533801001

在线出版日期：2018-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：79-84