苹果转录因子MdHB1的原核表达与多克隆抗体制备

摘要：

HD-Zip转录因子在植物生长发育过程中具有重要作用,蛋白水平的研究有助于进一步阐释其功能.将苹果转录因子基因MdHB1分别连接到pGEX-6p-1和pET-28a(+)表达载体,热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21 (DE3),随后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,分别得到了带有GST和6×His标签的MdHB1融合蛋白(分别命名为MdHB1-GST和MdHB1-His6).十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,在 18、28 ℃和37 ℃ 3 个温度诱导条件下都是沉淀中MdHB1-GST融合蛋白的量较多,37 ℃尤为明显,较低的诱导温度(18 ℃和28 ℃)能够提高融合蛋白MdHB1-GST可溶性形式存在的比例;28 ℃条件下50 mg/L IPTG诱导的总蛋白量在8 h左右达到最大,且受IPTG质量浓度(10、50、100 mg/L)的影响不大.以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白MdHB1-His6为抗原,成年兔免疫以制备多克隆抗体.间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高.蛋白质免疫印迹实验结果说明,所制备多克隆抗体特异性良好,能够从菌体和苹果幼叶总蛋白中成功检测MdHB1蛋白.综上所述,本实验所得多克隆抗体能够用于深入研究MdHB1在植物体内的功能.

关键词：苹果、转录因子、HD-Zip、MdHB1、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：39

分类号：S661.1(果树园艺)

资助基金：国家现代农业苹果产业技术体系建设专项CARS-27

在线出版日期：2018-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：69-76