10.7506/spkx1002-6630-201804012
嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析
分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用.为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体pET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Trans etta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性.结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20 kDa左右;Mg2+、Zn2+、Mn2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性.进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8 条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205.
嗜酸乳杆菌、分选酶A、基因克隆、酶学特性、结构特性
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Q814.1(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金面上项目31671869,31471598;国家自然科学基金青年科学基金项目31671487;浙江省自然科学基金青年基金项目LQ16C200002;宁波市科技富民项目2016C10022
2018-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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