金黄色葡萄球菌M型肠毒素原核表达、纯化、鉴定及溶液构象分析

摘要：

葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原.本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal enterotoxin M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E.coli Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose 4 Fast Flow亲合层析纯化出His-ΔNspSEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNspSEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNspSEM在278nm和295nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNspSEM重组蛋白表现出较高的热稳定性.研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNspSEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持.

关键词：金黄色葡萄球菌M型肠毒素、原核表达、纯化、质谱、圆二色谱、荧光发射谱、热稳定性

所属期刊栏目：38

分类号：TS201.1(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31371781;四川省应用基础项目2014JY0253;西南民族大学大学生创新创业训练计划项目201610656053;四川省教育厅项目15ZB0482

在线出版日期：2018-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：40-46