引物3'端不同碱基错配情况下实时荧光定量PCR非特异性扩增的发生规律

摘要：

以错配反应与正常反应之间的△Ct值为指示,研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物3'端与模板之间非特异性扩增的发生规律,并构建△Ct值的二次多项式回归模型.结果表明,碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)的非特异性扩增都有显著影响,并呈现出较强的规律性.碱基类型上,研究的各个位置上异型错配较易发生非特异性扩增,而同型错配则较难发生,并且两种错配类型之间有显著性差异(P＜0.05);错配位置上,相同条件下引物3'端第1位碱基错配对△Ct值影响最大,错配位置远离3'端时对△Ct值的影响逐渐减小,非特异性扩增也更容易发生;错配个数上,随着错配碱基个数的增加对△Ct值得影响程度不断增大,非特异性扩增较难发生.构建△Ct值预测模型R2达到0.837 1,根据此模型可以预测出不同位置、不同错配类型条件下△Ct值,从而可以判断RT-qPCR非特异性扩增的发生的难易程度.

关键词：肉类掺假、循环阈值、碱基错配、非特异性扩增、引物特异性

所属期刊栏目：38

分类号：TS207.3(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31271877;“十三五”国家重点研发计划重点专项2016YFD0401203

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：277-283