Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶突变文库热稳定性提高突变体的筛选及鉴定

摘要：

利用易错聚合酶链式反应技术引入随机诱变,构建一个Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶突变体库.经过筛选,获得一个芳香基硫酸酯酶热稳定性提高的突变株4-153.序列分析表明,该突变体有2个氨基酸替换,包括D84A和H260L.以对硝基苯硫酸钾为底物,突变酶4-153 (M4-153)的最适反应温度为55℃,在45、50、55、60℃处理30 min后,M4-153分别保留85％、83％、48％和13％的残留酶活力.野生型酶(WT)在45、50、55、60℃处理30 min后,分别保留79％、68％、21％和1％的残留酶活力.M4-153与WT相比具有更好的热稳定性.M4-153的最适反应pH值为8.0,在pH 5.0～9.0范围内保持稳定.EDTA对突变酶的抑制作用表明,金属离子在突变酶的催化过程中起重要作用.M4-153对一些洗涤剂,包括Triton X-100、Tween 20、Tween 80和Chaps,有好的耐受性.M4-153对龙须菜粗多糖硫酸基团的脱硫率为79.5％.

关键词：芳香基硫酸酯酶、易错聚合酶链式反应、热稳定性提高、突变体性质

所属期刊栏目：38

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31401632;福建省高校新世纪优秀人才支持计划项目B15139

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：18-23