N-糖基化修饰对极端嗜热酸性α-淀粉酶ApkA酶学性质的影响

摘要：

为探索N-糖基化修饰对极端嗜热酸性α-淀粉酶ApkA酶学性质的影响,同时为构建酵母工程菌奠定基础,将ApkA缺失信号肽突变体ApkAds及含有2个潜在Ⅳ-糖基化修饰位点的突变体ApkAdsD182N/G373S在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中进行表达.ApkAds和ApkAdsD 182N/G373S在Pichia pastoris GS115中大量表达并分泌到胞外,ApkAds的表观分子质量约为45 kD,ApkAdsD182N/G373S的表观分子质量约为55 kD.酶学性质分析表明,-ApkAds相比,ApkAdsD 182N/G373S的酶学性质发生了一定的变化.其最适反应pH值由6.5降低至5.5～6.0,酸性条件下稳定性增强;最适反应温度由90℃提高至100℃;于90℃的半衰期由5h增加至5.5h,于100℃保温10 min后的相对酶活力由32.03％增加至49.04％.结果表明N-糖基化修饰可适当提高ApkA的酸性条件下酶活力和稳定性、最适反应温度、热稳定性.突变体ApkAdsD182N/G373S的酶学性质使其适于淀粉液化工艺的应用.

关键词：极端嗜热酸性α-淀粉酶、毕赤酵母GS115、N-糖基化修饰、分泌表达

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分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31501422;江西省青年科学基金项目20151BAB214001;江西省科学院资助项目2014-YYB-08,2014-XTPH1-08

在线出版日期：2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：48-54