小麦蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及重组酶性质

摘要：

目的:克隆小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI)基因,实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质.方法:以小麦种子总RNA为模板,逆转录并扩增得到wpdi,并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21 (DE3)为宿主菌进行原核表达,表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究.结果:克隆的基因全长1 548 bp,与“Wyuna”品种小麦wpdi基因相似性达99％.构建了pET-30b-wpdi表达载体,获得wPDI的最佳表达条件为:诱导温度22℃,诱导时间6h,诱导剂浓度0.5 mmol/L.该酶含4个硫氧还蛋白结构域,分子质量约为66.2 kD,具有二硫键的还原酶和异构酶活性以及分子伴侣活性.结论:对重组wPDI的表达和酶学性质研究,为wPDI在面制品加工及其他方面的应用提供参考依据.

关键词：小麦蛋白质二硫键异构酶、克隆、表达、酶学性质

所属期刊栏目：38

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上项目31471691,31130042;高等学校博士学科点专项科研基金项目20130172110018;广东省科技计划项目2014A010107002;佛山市科技计划项目2015AG10011

在线出版日期：2017-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：7-14