10.7506/spkx1002-6630-201611016
新型GH5家族β-甘露聚糖酶的基因挖掘及表达鉴定
为了获得性能优良的新型β-甘露聚糖酶,本研究采用基因挖掘技术从米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组中挖掘到了2个假定的新型GH5家族β-甘露聚糖酶基因,分别命名为Aoman5A和Aoman5B.对这两条序列做了相关的生物信息学分析,同时借助pPIC9KM质粒将两个酶的成熟肽编码基因在Pichia pastoris GS115中实现了表达,并对表达产物进行了纯化和鉴定.生物信息学分析的结果表明AoMan5A含有20个氨基酸残基的信号肽,而AoMan5B含有21个氨基酸残基的信号肽和12个氨基酸残基的前导肽;序列比对的结果显示两个酶与目前已报道的序列最高的同源性分别为68％和79％,且AoMan5A的N端还携带有一个1家族的CBM;三维结构预测的结果显示,两者均符合(a/β)8的TIM-桶状结构.表达鉴定的结果表明,在同样表达条件下,reAoMan5A和reAoMan5B上清液的酶活力分别为2.9、12.5 IU/mL;纯化后它们的酶比活力分别为8.3、104.2 IU/mg,前者的最适温度为35℃,而后者的最适温度为50℃,pH值特性的测定结果表明这两种酶均为酸性酶.硫酸-苯酚法测得reAoMan5A和reAoMan5B的糖含量分别为25.4％和12.6％,表明这两种重组酶均经过了糖基化修饰.本研究获得了两种新型的β-甘露聚糖酶,比较分析了它们的序列特征,并实现了它们的异源表达,为β-甘露聚糖酶的进一步研究及应用奠定了坚实的基础,也为其他新型酶的基因挖掘提供了可资借鉴的经验.
β-甘露聚糖酶、基因挖掘、生物信息学分析、米曲霉、蛋白表达
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Q814(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金青年科学基金项目31401989;河南省高等学校重点科研计划项目15A416008
2016-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
90-96
