花生过敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表达

摘要：

本实验首先从花生中提取总RNA,利用反转录聚合酶链式反应技术克隆了花生过敏原蛋白Ara h 6全cDNA,并以此为模板扩增出Ara h 6目的基因.将目的基因与pMD19-T Simple质粒进行重组后转入BL21 (DE3)宿主表达菌中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导产物表达,并利用镍离子亲和层析纯化表达产物.DNA测序结果显示Ara h 6基因片段全长为438 bp,编码145个氨基酸,与已知该蛋白DNA序列97％相同;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物分子质量为24 kD,与融合组氨酸标签的重组Ara h 6蛋白理论分子质量相符;质谱鉴定结果表明重组蛋白的一级结构与天然Arah 6匹配度为100％;Western blotting结果显示融合蛋白能够为抗Arah 6多克隆抗体所识别,具有免疫原性.

关键词：花生、过敏原、Ara h 6、基因克隆表达、质谱鉴定

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分类号：TS207.2(食品工业)

资助基金：“十二五”国家科技支撑计划项目2011BAK10B03;国家高技术研究发展计划863计划项目2013AA102205;江西省科技支撑计划项目20133BBF60004

在线出版日期：2016-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：125-130