乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌中的表达与纯化

摘要：

为了实现该细菌素的外源表达,本实验首先利用聚合酶链式反应从乳酸片球菌PAF中扩增出乳酸片球菌素PA-1的结构和免疫基因,然后克隆到表达载体pGEX-6p-1,构建了N端含有GST-His-DDDDK标签的重组质粒pGEX/his-pedAB,然后转化进入大肠杆菌Rosetta (DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,重组乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌胞内成功表达.表达的融合蛋白先经过镍亲合层析柱纯化,然后注入谷胱甘肽S-转移酶亲和色谱柱用肠激酶处理,释放出成熟的乳酸片球菌素PA-1.利用高效液相色谱和质谱技术检测乳酸片球菌素PA-1纯度.以单核细胞增生李斯特氏菌CMCC54004为指示菌,利用琼脂扩散法检验乳酸片球菌素PA-1活性.结果表明,携带GST-His-DDDDK标签的融合蛋白无活性,标签切除后其抑菌活性恢复,且其纯度达90％以上.

关键词：细菌素、乳酸片球菌素、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：37

分类号：TS201.2(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31271930;江苏省研究生培养创新工程项目KYLX_1167;江苏高校优势学科建设工程资助项目;江苏省普通高校研究生科研创新计划项目CXZZ13_0636

在线出版日期：2016-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：97-102