基于内参的大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

摘要：

针对大肠埃希氏菌O157:H7 rfbE和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方法.结果表明,该方法对Ecoli O157:H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL;对细菌的最低检测限为5×103 CFM/mL;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999).人工污染实验结果表明,在初始菌量为7 CFM/25 g时,采用水洗加试剂盒法提取DNA,E.coli O157:H7在增菌6h后即可检出;而采用水煮法提取DNA,则在增菌10 h后方可检出.建立的E.coli O157:H7实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中O157:H7,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生.

关键词：大肠埃希氏菌O157:H7、rfbE、Flic、实时荧光定量PCR、内参

所属期刊栏目：36

分类号：R155.5(营养卫生、食品卫生)

资助基金：质检公益性行业科研专项201210128,201310126

在线出版日期：2015-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：226-231