鲢鱼重组Cystatin的原核表达、鉴定及对铜绿假单胞菌的抑制作用

摘要：

本实验主要对鲢鱼半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystatin进行原核表达和纯化鉴定,并研究重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果.首先用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导转入pET-30-Cystatin的E.coli BL21 (DE3)表达重组Cystatin蛋白,经Ni2+-NTA镍离子亲和层析对其进行纯化,该重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一条带,分子质量约20.6 kD,在TSK-GEL G2000SW凝胶过滤高效液相色谱上呈单一活性峰,纯度为94.27％,经标准曲线计算其分子质量为20.9 kD;其次,利用抑制剂滴定曲线法,以偶氮酪蛋白为底物,确定重组Cystatin对木瓜蛋白酶(45.375 μmol)的一个抑制活性单位为0.718 μg;最后通过滤纸片扩散法鉴定鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果,结果表明Cystatin的添加量为20、60、120、200 U/片时,抑菌圈直径分别为8、9、13、26 mm.鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果呈剂量依赖关系.

关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂、鲢鱼、原核表达、鉴定、铜绿假单胞菌、抑菌活性

所属期刊栏目：35

分类号：TS254.1(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31101249

在线出版日期：2014-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：133-137