河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化

摘要：

目的:构建河南华溪蟹金属硫蛋白(metallothionein,MT)分泌型表达载体并诱导其可溶表达.方法:采用基因重组技术,将河南华溪蟹MT基因亚克隆至碱性磷酸盐启动子(alkaline phosphatase promoter,phoA)分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3),通过低磷酸盐诱导重组蛋白表达,经Ni2+螯合柱分离纯化后,利用紫外光谱扫描分析、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)及Western blotting检测鉴定重组MT.结果:phoA-MT分泌型表达载体构建成功,工程菌经低磷酸盐诱导后重组MT以可溶形式获得表达,紫外光谱扫描和Western blotting证实表达产物的正确性,SDS-PAGE分析其纯度较高,主要以单体和二聚体的形式存在,其分子质量分别约为7.5、15 kD.结论:成功实现了河南华溪蟹MT的重组表达.

关键词：河南华溪蟹、金属硫蛋白、表达

所属期刊栏目：35

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金面上项目30970361;高等学校博士学科点专项科研基金项目20111401110010;山西省自然科学基金项目2010011043-2

在线出版日期：2014-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：128-132