天冬氨酸激酶突变体G277K中AK基因的克隆表达及酶学性质表征

摘要：

通过序列比对和晶体结构分析发现,天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)的G277位点高度保守,并与抑制剂Thr通过氢键相连,对其进行定点突变和酶学性质表征.结果表明:突变体G277K的AK最适反应条件是30℃、pH 8.5;动力学实验结果显示突变体AK的正协同效应降低,趋向于米氏酶,参数S0.5、nH、酶比活力、Vmax分别是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143U/(mg·min);热稳定性实验显示,其30℃半衰期为2.3h,3h后酶活力丧失80％左右;Ni2+在低浓度时表现出显著的激活效应;有机溶剂丙三醇、异丙醇和二甲基亚砜的体积分数为1％时,对AK的酶活力有很好的激活作用,表明突变体AK对一些有机溶剂有一定的抗性;低浓度的赖氨酸和蛋氨酸对AK有激活作用.

关键词：天冬氨酸激酶、克隆表达、定点突变、酶学性质

所属期刊栏目：35

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：吉林省自然科学基金项目20130101139JC

在线出版日期：2014-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：149-154