北京棒杆菌天冬氨酸激酶G377定点突变及酶学性质表征

摘要：

采用饱和定点突变和高通量筛选技术,对北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK) AK Gly377位点进行突变,并筛选获得高活力突变体G377F,分离纯化后对G377F AK酶学性质进行表征.结果表明:突变体AK最适pH值为9.0,较突变前野生型(wide type,WT)最适pH值为8.5有所提高;最适反应温度与WT一致,均为25℃;半衰期由WT的2.6h提高到5.3h;pH耐受性在5h内保持其活力50％以上,与WT3h内酶活力保持能力相同.G377F对金属离子和有机溶剂均表现出良好的抗性.其中,Lys的抑制作用在一定程度上被解除,当Lys和Met同时存在时对AK具有明显的激活作用.动力学研究显示:G377F AK Vmax较WT提高9.3倍;n值为1.0明显低于WT的2.7,说明AK正协同性降低,趋向于米氏酶.

关键词：北京棒杆菌、天冬氨酸激酶、定点突变、酶学性质

所属期刊栏目：35

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：吉林省自然科学基金项目20130101139JC

在线出版日期：2014-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：192-197