过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌构建及发酵性能

摘要：

乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力.根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍.为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L·h),较原始菌株L.casei分别提高了35％和53％,发酵周期缩短6h.

关键词：乳酸脱氢酶、重组干酪乳酸菌、高效表达、发酵特性

所属期刊栏目：34

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：安徽省高校自然科学研究基金项目KJ2010B014

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：245-249