Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达

摘要：

用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白a2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序.将测序正确的重组质粒用限制性内切酶Sal线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中.通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌.在酵母a-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外.1％甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD.

关键词：胶原蛋白、pPIC9K、毕赤酵母

所属期刊栏目：34

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：吉林省科技厅自然科学基金项目201115189

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：224-227