重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶的纯化和性质

摘要：

目的:探讨重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的分离纯化过程及其性质.方法:摇瓶发酵得到的粗酶液经Q-Sepharose Fast Flow层析纯化,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定其分子质量,用紫外和荧光分光光度计研究其光谱特征.结果:获得GOD的纯品,酶的纯化倍数为1.35倍,酶活回收率为92.7％,天然分子质量为150kD,亚基分子质量为75kD;酶活力在pH5.0～8.0和55℃以下稳定,最适pH值为6.0,最适温度为40℃；以葡萄糖为底物的酶学动力学常数Km值为21.06mmol/L; Hg2+、Ag+、Cu2+、Fe2+对其有强烈的抑制作用；该酶在275nm波长处有最大紫外光吸收,在344nm波长处有最大荧光吸收峰；液体状态下该酶在4℃条件下放置6个月活性没有损失,常温下可保存3～5d.结论:重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶纯化成本低,收率高,有利于大规模纯化,得到的纯品稳定性好,具有较高的利用价值.

关键词：毕赤酵母、葡萄糖氧化酶、纯化、性质

所属期刊栏目：34

分类号：Q939.97(微生物学)

资助基金："十一五"国家科技支撑计划重点项目2008BAI63B07

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：159-163