大肠杆菌重组表达磷脂酶C的发酵工艺优化

摘要：

以重组表达铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大肠杆菌BL21 (DE3)/pET28a-plcH为考察菌株,从TB培养基出发,在优化缓冲液、碳源种类和质量浓度的基础上,比较异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖诱导重组酶表达的效果,并考察甘氨酸对重组酶发酵的影响；最后,在7L发酵罐规模对上述优化工艺进行放大验证.结果表明:重组大肠杆菌最适培养基组成为:蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L,0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2～7.4)缓冲液配制；在此培养基中添加卡那霉素(Kana)的质量浓度至0.15mg/mL,37℃、200r/min培养6h后,添加乳糖至终质量浓度为5g/L,在25℃、150r/min诱导培养20 h,重组磷脂酶C活力可达到(1422.42±37.17)U/mL; 7L发酵罐实验中,总酶活力达到(11583.35±70.21)U/mL,比摇瓶条件下提高了7倍左右,其中胞内酶活力最高为(10957.97±58.03)U/mL,胞外酶活力最高为(645.27±13.87)U/mL.

关键词：磷脂酶C、重组大肠杆菌、发酵过程、工艺优化

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分类号：Q936(微生物学)

资助基金：国家"863"计划项目2011AA100905;教育部"新世纪优秀人才支持计划"项目NCET-11-0665;江南大学食品科学与技术国家重点实验室自由探索资助课题SKLF-ZZA-201201

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：143-149