10.7506/spkx1002-6630-201309027
肝素黄杆菌硫酸软骨素酶AC的高效重组表达体系构建及其酶学性质研究
为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrapHP可实现一步纯化,使纯度可达95％以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量).对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5～8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20～35℃.MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h.同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响.通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L.
亲和纯化、硫酸软骨素酶AC、酶学性质、表达量优化、麦芽糖结合蛋白、重组表达
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Q814.1(生物工程学(生物技术))
国家"863"计划项目2012AA022201;北京市属高等学校人才强教计划项目PHR201107151;北京电子科技职业学院院内重点课题YZKB2011003;北京市属高等学校人才强教深化计划资助项目
2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
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