内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化

摘要：

链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化.蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本.为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化.结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达.在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得).重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近；且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响.

关键词：蛋白质剪接技术、内含肽、酶原活化、谷氨酰胺转胺酶、吸水链霉菌

所属期刊栏目：34

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目31070711;教育部科学技术研究重大项目311023

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：90-94