重组脂肪氧合酶基因工程菌破碎条件优化及其酶活力测定方法研究

摘要：

建立适用于从重组E.coli中提取重组脂肪氧合酶非机械法的破碎条件。采用化学渗透法、冻融法和酶解法破碎重组E.coli细胞,并采用单因素试验和L25（56）正交试验对细胞破碎条件进行优化。结果表明：溶菌酶添加量为1.5mg/mL、溶菌酶处理时间40min、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）添加量为2.0mmol/L、吐温-60添加量为2%、冻融温度（-70℃冷冻37℃融解）、冻融次数3次,效果最佳,获得粗酶液的脂肪氧合酶（LOX）酶活力为6840U/mL,比优化前（4750U/mL）提高了0.44倍;并在此条件下,比较分光光度法、碘化钾-淀粉法和二甲苯酚橙法测定LOX酶活力,其中碘化钾-淀粉法简单、灵敏、快速,且测定体系具备肉眼可辨的特征颜色,可用于LOX酶活性高通量筛选。

关键词：脂肪氧合酶、化学渗透法、冻融法、酶解法、酶活力测定法

所属期刊栏目：33

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31071605;江苏省科技支撑计划项目BE2011390;苏州市科技支撑计划项目SN201105

在线出版日期：2013-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：160-165