荧光染料EMA在实时荧光PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用

摘要：

将荧光染料——叠氮溴乙锭（ethidium bromide monoazide,EMA）与实时荧光-聚合酶链式反应（real-time poly-merase chain reaction,RT-PCR）技术相结合,对其在RT-PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用进行研究。纯培养条件下,在2.2×102～2.2×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且不添加EMA时的检测灵敏度（22CFU）略大于添加EMA（2.2×102CFU）时的检测灵敏度;人工污染牡蛎样品,利用RT-PCR和EMA RT-PCR以及平板计数法分别进行副溶血弧菌定量检测,结果表明EMA RT-PCR更接近于平板计数的结果,单纯RT-PCR定量的结果偏大;在采集的45份海产品样品中,不经富集培养,利用EMA RT-PCR方法仅有一份牡蛎样品呈阳性,牡蛎样品污染程度为114CFU/g。该方法能够快速、灵敏、准确地进行海产品中致病性副溶血弧菌活细胞的定量检测,具有很好的应用价值。

关键词：叠氮溴乙锭(EMA)、实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)、海产品、活细胞、副溶血弧菌检测

所属期刊栏目：32

分类号：TS201.6(食品工业)

资助基金：辽宁大学青年科学基金2009LDQN21

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：206-210