黑曲霉酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要：

以黑曲霉Aspergillus niger基因组DNA为模板,PCR扩增出酸性α-淀粉酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,重组质粒pPIC9K-asAA转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,酸性α-淀粉酶大量表达并分泌到胞外,该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,摇瓶培养中,2%甲醇诱导培养168h后酶活力达到最大值2838U/mL。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子质量为58kD。该酶的最适反应pH值为4.0,在pH3.0～6.0之间酶活力基本保持稳定,最适反应温度为70℃,在工业生产常用温度50℃条件下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。

关键词：黑曲霉、酸性α-淀粉酶、pPIC9K、毕赤酵母SMD1168

所属期刊栏目：32

分类号：Q814.4(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30871739;31071556;国家"863"计划项目2011AA100801

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：219-224