吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立

摘要：

通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA).对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性.在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株.结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克降抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10<'-6>～3.24×10<'-4>mg/mL(R<'2>=0.9928),最低检测限为8.00×10<'-6>mg/mL.

关键词：吡虫啉、单克隆抗体、残留、酶联免疫吸附测定法

所属期刊栏目：32

分类号：TQ453.2

资助基金："十一五"国家科技支撑计划基大项目2006BAK02A21/1;河南省高校科技创新人才支持计划项目2010HASTIT026

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：228-233