基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞

摘要：

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法.结果表明:使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.Oμg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×10(3)-2.0×10(7)CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×10(3)CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响.该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法.

关键词：叠氮溴化乙锭(EMA)、实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、海产品、副溶血弧菌、活细胞

所属期刊栏目：32

分类号：TS201.6(食品工业)

资助基金：教育部留学回国人员基金项目2006331;辽宁省科技厅项目20062109;沈阳市科技局项目1063312-1-00,090009

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：219-225