半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库

摘要：

目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体.方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库,辅助噬菌体KM13感染后得到噬菌体展示库.采用固相淘选法分别对3种人工抗原进行淘选.结果:单域重链抗体编码基因得到有效扩增,经10次电转化获得初级文库,命名为SNAL,实际库容量达到1.6×107个独立克隆,菌落PCR鉴定结果表明,克隆效率约为87%,辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL,滴度达1013CFU/mL.对3种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA和AFB1-OVA的淘选均有富集现象.结论:构建了天然噬菌体单域重链抗体文库,文库的多样性较好,可以用于后续淘选.

关键词：单域重链抗体、VHH 抗体、噬菌体文库、羊驼、半抗原

所属期刊栏目：31

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家中小企业创新基金项目09C26213604449:江西省教育厅青年科学基金项目GJJ09442;江西省自然科学基金

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：299-303