单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化

摘要：

以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因.在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoR I和Xho I 2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap.经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap.在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coli BL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右.诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,其提取率为68.3%左右.

关键词：单核细胞增多性李斯特菌、iap基因、克隆、表达、p60蛋白、纯化

所属期刊栏目：31

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家大学生创新性实验计划资助项目200837

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：157-161