亲和层析法分离纯化蒜氨酸酶

摘要：

目的:以蒜氨酸酶竞争性抑制剂S-烷基-L-半胱氨酸为配基,制备亲和层析胶分离纯化蒜氨酸酶.方法:以1,4-丁二醇二缩水甘油醚为活化剂,在碱性条件下,活化载体Sepharose CL-4B,偶联半胱氨酸,作为蒜氨酸酶的亲和层析胶.低温粉碎大蒜所得的大蒜液,经25%PEG-5000沉淀,得到粗酶.用制得的亲和胶分离纯化,并利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验.结果:大蒜液用25%PEG-5000沉淀可以较简便地分离出粗酶,经制得的亲和胶层析,活力回收达到68.42%,比活力为9.493U/mg,纯化倍数达到22.17倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为52kD.纯酶的最适温度为35℃,最适pH值为6.23,Km=9.845mmol/L,Vmax=24.93 U/mg.结论:以S-烷基-L-半胱氨酸为配基制得了,适合于蒜氨酸酶分离纯化的亲和载体.

关键词：蒜氨酸酶、分离纯化、亲和层析、S烷基-L-半胱氨基

所属期刊栏目：30

分类号：TS201.2(食品工业)

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：244-247