鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因的克降、表达、纯化及免疫学鉴定

摘要：

目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因并柃验其免疫活性.方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RT-PCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T载体中进行测序和分析.设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中进行诱导表达.通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE结合活性.结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3.基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸.该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000.表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性.结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性.

关键词：鸡蛋、过敏原、基因克隆、表达、Gald3

所属期刊栏目：30

分类号：Q785;TS201.6;TS253.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家"863"计划项目2006AA100308;广东省科技重点专项项目2003A3080502;深圳市科技计划项目200326;深圳大学校科研基金项目200712

在线出版日期：2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：142-146