双孢蘑菇RAPD-PCR反应体系的优化

摘要：

本研究对6个影响双孢蘑菇RAPD-PCR反应的关键因素进行了一系列优化,目的在于建立理想的RAPD最佳反应条件和反应体系,为大量双孢蘑菇品种间的RAPD多样性分析做准备.各关键因素梯度设置如下:(1)7个退火温度梯度:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃.(2)6个Mg2+浓度梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L.(3)5个Taq酶用量梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U.(4)5个dNTPs浓度梯度:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L.(5)5个引物浓度梯度:0.1、0.2、o.3、0.4、0.5lamol/L.(6)7个模板DNA用量梯度:100、20、4、0.8、0.16、0.032、Ong.实验结果表明:最佳的RAPD反应体系为:10×buffer 2.0μl、Taq酶1.5U、模板DNA4-100ng、MgCl2 2.0mmol/L、dNTP 0.20mmol/L,引物0.3μmol/L,加ddH20至20μl.PCR热循环参数为94℃预变性5 min;94℃变性lmin,44℃退火1min 50s,72℃延伸2min,循环40次;最后72℃延伸7min.

关键词：蘑菇、RAPD-PCR、体系优化

所属期刊栏目：29

分类号：TS207;Q78(食品工业)

资助基金：国家质量监督检验检疫总局科技项目2007IKl59

在线出版日期：2009-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：428-432