噬菌体随机肽库淘选桔霉素模拟表位的研究

摘要：

目的:从噬菌体随机肽库中淘选模拟桔霉素表位的噬菌体粒子.方法:以抗桔霉素的单克隆抗体为配基,分别免疫亲和淘选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机7肽库和12肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序以分析插入的7肽和12肽的氨基酸序列.结果:经过3轮淘选,在7肽库中淘选到20株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,在12肽库中淘选到33株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合均能被桔霉素阻断,模拟表位的共有序列为X-组氨酸-赖氨酸-X-X-X-X,X为任意氨基酸.以7肽库中亲和力最强的克隆(P10)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为10～325 ng/ml,检测下限为10 ng/ml;以12肽库中亲和力最强的克隆(P1)建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为10～439 ng/ml,检测下限为10 ng/ml.结论:噬菌体展示技术可成功淘选到桔霉素模拟表位,高度保守的His和Lys的存在,提示His和Lys在CIT与其配体的结合中可能起重要作用.

关键词：噬菌体示肽库、模拟表位、桔霉素、单克隆抗体、免疫分析

所属期刊栏目：27

分类号：TS2(食品工业)

资助基金：教育部长江学者和创新团队发展计划IRT0540

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：67-70