大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

摘要：

利用基因重组技术,克隆了大豆(Glycine max(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)全基因,构建pET-GM PAL工程表达质粒,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并利用细胞裂解液得到的粗酶液转化L-苯丙氨酸生成肉桂酸.通过8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在77.9kD的一条蛋白质特异表达带,特异蛋白质表达量达到总蛋白质含量的8%左右.通过初步发酵,获到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力达到211.7μmol/g pro·min(3529μkat/kg),高于红酵母PAL和欧芹重组PAL表达的比活力.结果表明克隆重组的大豆PAL基因通过表达质粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表达为有催化功能的高活力酶.

关键词：苯丙氨酸解氨酶(PAL)、pET-31b(+)、基因克隆、重组表达、肉桂酸

所属期刊栏目：27

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30371005;39970469

在线出版日期：2006-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：29-35