多粘类芽孢杆菌适冷性新型β-半乳糖苷酶的重组表达和酶学性质

摘要：

目的:本实验旨在挖掘一个适冷性新型β-半乳糖苷酶,为低温生产低乳糖乳制品或合成低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS)提供基础.方法:从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)基因组中克隆一个β-半乳糖苷酶(PpBgal42A)基因,构建重组表达质粒pET-28a-PpBgal42A在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经亲和层析纯化后研究重组β-半乳糖苷酶的酶学性质,利用高效液相色谱检测各糖分浓度,以GOS转化率为指标,评价PpBgal42A的转糖苷能力.结果:PpBgal42A与酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)来源的糖苷水解酶 42家族β-半乳糖苷酶同源性最高,为 59.9%.纯化后,PpBgal42A的比活力为 163.7 U/mg,分子量约为 79 kDa.其最适pH和温度分别为pH7.5和 35℃,在pH7.0～9.5范围内和 4～35℃以下保持稳定,50℃时快速失活,35℃时的半衰期为 1777 min.PpBgal42A利用 350 g/L乳糖于 30℃反应 6h后合成GOS的转化率为31.6%.结论:PpBgal42A是一个适冷性新型β-半乳糖苷酶,可水解乳糖并合成低聚半乳糖,具有潜在应用价值.

关键词：多粘类芽孢杆菌、β-半乳糖苷酶、酶学性质、适冷性、低聚半乳糖

所属期刊栏目：44

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金32072163

在线出版日期：2023-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：125-133