D-阿洛酮糖3-差向异构酶在大肠杆菌内的高效可溶性表达及发酵条件研究

摘要：

将来源于Clostridium bolteae ATCCBAA-613的DAEase基因序列经密码子优化合成,以pCold TF为表达载体,冷休克启动子CspA低温诱导DAEase基因在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,得到高效可溶性的重组Cb-DAEase并利用镍柱亲和层析分离纯化.结果表明,Cb-DAEase最适pH和温度为7.0和55℃,Co2+能够显著(P<0.05)增强酶活力.对培养条件进行优化得到,在7 g/L甘油、10 g/L酵母膏、1％接种量、0.25 mmol/L IPTG、诱导前培养5 h的条件下,Cb-DAEase活力达到(10.11±0.02)U/g,比优化前(1.38±0.01)U/g提高了7.33倍;以120 g/L的D-果糖为底物全细胞催化0.5 h后,D-阿洛酮糖产量为(11.47±0.04)g/L,比优化前(1.03±0.02)g/L提高了11.14倍.基于冷休克表达策略构建的重组菌经发酵优化后Cb-DAEase活力显著(P<0.05)提高,为高效制备D-阿洛酮糖提供了理论支持.

关键词：D-阿洛酮糖3-差向异构酶、大肠杆菌、冷休克、可溶性表达、酶学性质、发酵优化

所属期刊栏目：43

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：广西自然科学基金资助项目;崇左市科技计划项目

在线出版日期：2022-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：136-143