牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得αS1-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别αS1-酪蛋白的兔多克隆抗体.方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对αS1-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质(等电点和含量)、免疫学技术和质谱技术对纯化的αS1-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的αS1-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性.结果:在4种酪蛋白中,αS1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26％的αS1-酪蛋白,得率为27.19％.免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应(<0.25％)外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高.结论:本研究制备了高纯度的αS1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为αS1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础.

关键词：牛乳过敏原、αS1-酪蛋白、纯化、鉴定、多克隆抗体

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分类号：TS201.6(食品工业)

资助基金：赣南医学院博士启动课题;赣南医学院重点科研课题;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室开放课题;江西省自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：106-114