蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法的建立

摘要：

目的:旨在建立一种检测蘑菇中鹅膏毒肽(Amanitin,AMA)的间接竞争酶联免疫吸附方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA).方法:通过EDC/NHS在α-鹅膏毒肽的羧基位置引入6-氨基己酸得到半抗原,并进一步与不同的载体蛋白偶联制备免疫原和包被原.之后,利用免疫原免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体.基于所获得的抗体,并通过对包被原和抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标二抗工作浓度和孵育时间等条件的优化,建立了蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA检测方法,最后对所建立方法的灵敏度、添加回收率、批内及批间变异等参数进行了评价.结果:合成的半抗原分子量为1033.12,经MALDI-TOF鉴定免疫原的偶联比约为10.03.基于杂交瘤技术制备、筛选出鼠单克隆抗体13H4的IC50为1.91μg/L.基于所获得单克隆抗体,所建立蘑菇中鹅膏毒肽间接竞争ELISA方法的检出限为0.88μg/kg,添加回收率为85.66％～113.05％,批内变异系数为5.35％～9.54％,批间变异系数小于15％.结论:本研究所建立的ic-ELISA方法准确度、精密度、灵敏度较高、性能稳定,为突发毒蘑菇中毒事件的毒原分析提供了一种简便、可靠的快速检测方法.

关键词：蘑菇;鹅膏毒肽;间接竞争酶联免疫吸附测定法

所属期刊栏目：43

分类号：TS207.3(食品工业)

资助基金：国家重点研发计划2018YFC1602700

在线出版日期：2022-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：294-301