CP4-EPSPS蛋白抗体的制备及其夹心ELISA定量检测方法的建立

摘要：

为了快速高效地检测转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆,本研究利用已制备的CP4-EPSPS蛋白免疫实验动物,获得5株CP4-EPSPS蛋白鼠单克隆抗体及3份羊抗血清,建立了CP4-EPSPS蛋白双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,同时利用该方法对结荚期的Cp4 epsps转基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子进行定量检测.结果 显示,最佳检测条件为捕获抗体1D12,工作浓度1.25 μg/mL,包被酶标板,4℃静置过夜,检测样品20℃孵育45 min,检测抗体8092,工作浓度2.5 μg/mL,20℃孵育30 min;CP4-EPSPS蛋白在模拟大豆环境中最低检测限为3.6 ng/mL,检测范围为7.5～125 ng/mL;重复性变异系数小于15％.利用上述检测条件,在转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子中均检测到CP4-EPSPS蛋白的表达,且各组织部位表达量差异显著,其中CP4-EPSPS蛋白在叶片中表达量最高,茎、种子、根中CP4-EPSPS蛋白表达量逐渐降低.

关键词：CP4-EPSPS、酶联免疫吸附(ELISA)、大豆、抗体、检测

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分类号：TS201.2(食品工业)

资助基金：吉林省农业科技创新工程自由创新项目;抗除草剂基因编码蛋白Bar/PAT检测试纸条的研制;吉林省省级产业创新专项资金项目;转基因农产品检测试剂原料及检测产品的研发;吉林省科技厅重点研发项目;转基因农产品快速检测试剂的研发与应用;国家大豆产业技术体系

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：69-74