多聚半乳糖醛酸酶在黑曲霉中的超量表达及其酶学性质研究

摘要：

运用基因工程手段,构建高效表达多聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉重组菌株,并对重组酶活性及酶学性质进行研究,以期更好的实现多聚半乳糖醛酸酶在食品加工、饲料生产及废水处理中的重要作用.从果胶酶生产菌黑曲霉GJ-1中扩增得到多聚半乳糖醛酸酶基因pgaB的成熟肽编码序列(1232 bp),集成glaA多拷贝强启动子和信号肽,构建其黑曲霉表达载体pSZHG6RS-pgaB,通过农杆菌介导法转化黑曲霉,获得多聚半乳糖醛酸酶黑曲霉重组菌株.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测结果表明,目的蛋白大小约为38 kDa;在发酵第10 d时酶活最高达到4617.8 U·mL-1 .酶学性质研究表明,最适温度为50 ℃,高温时热稳定性较差;最适pH为5.0,碱性耐受能力较强;Ca2+、Fe3+、Fe2+均对重组酶有一定激活作用;重组酶对不同底物的催化能力不同,甲酯化程度越高酶对其降解能力越弱,其中对无甲酯化的多聚半乳糖醛酸催化能力最强,DE值为33.04% .重组菌株产酶活性较高,具有明确的产业化前景.

关键词：黑曲霉、多聚半乳糖醛酸酶、超量表达、酶学性质、重组菌株、基因工程

所属期刊栏目：41

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划uNPYSCT-2018161;哈尔滨市科技局应用技术与开发项目2017RAYXJ009

在线出版日期：2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：80-85